Alexa Fluor 488

1、Alexa Fluor 488的荧光特性

Alexa Fluor 488是一种磺化罗丹明类荧光染料，其分子结构中含有磺酸基团，赋予了该染料较好的水溶性。在光学性能方面，Alexa Fluor 488的激发波长约为495 nm，发射波长约为519 nm，呈现绿色荧光信号。

与早期荧光染料相比，Alexa Fluor 488具有一些值得关注的特性。该染料的荧光量子产率较高，意味着吸收的光子中转化为发射荧光的比例较为可观。其光稳定性表现良好，在持续激发条件下能够保持较长时间的荧光信号输出，这一特性对于需要长时间成像或共聚焦显微镜观察的实验较为重要。此外，该染料的荧光强度受pH变化的影响相对较小，在中性至弱碱性范围内均能保持较稳定的信号。

2、Alexa Fluor 488-HRP的组合形式

Alexa Fluor 488-HRP并非单一的化学实体，而是涵盖多种组合方式的功能性试剂体系。常见的实验形式包括以下几种：

直接偶联物：通过化学方法将Alexa Fluor 488分子与HRP酶蛋白共价连接。该复合物同时具备荧光发射与酶催化两种功能，可根据实验需求选择不同的检测模式。

抗HRP抗体复合物：将Alexa Fluor 488标记于抗HRP抗体上，形成荧光标记的二抗体系。该试剂可识别并结合体系中的HRP分子，用于信号放大或多重检测。

酪胺信号放大体系：Alexa Fluor 488与酪胺（Tyramide）偶联，在HRP催化下，活化的酪胺自由基与邻近蛋白的酪氨酸残基共价结合。该机制可实现信号放大，据报道放大倍数可达10至200倍。

3、应用场景与优势

多重荧光标记：Alexa Fluor 488的发射光谱与FITC检测通道兼容，可与其他荧光染料如Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 647等组合使用，实现多个靶标的同时检测。

长时间成像观察：由于Alexa Fluor 488具有较好的抗光漂白能力，适用于需要长时间扫描的共聚焦显微镜实验或活细胞成像研究。

低丰度靶标检测：结合酪胺信号放大技术，Alexa Fluor 488-HRP体系能够检测常规方法难以识别的低表达量靶标，同时减少一抗的使用量。

4、实验操作注意事项

在应用Alexa Fluor 488-HRP时，需要注意以下几点：荧光观察时建议控制激发光照射时间，避免不必要的信号衰减。若使用酪胺放大体系，需优化反应时间以防止背景信号增高，试剂盒中通常配备终止液用于控制反应进程。内源性过氧化物酶的活性可能产生非特异性信号，实验前可使用相应的封闭液进行处理。此外，叠氮钠会抑制HRP酶活性，不宜在相关缓冲液中添加该成分。

来源：西安德而塔生物，以上仅用于科研，不能用于人体实验。

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